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                                              手把手教你如何玩轉分光光度法

                                              日期:2020-09-07 22:08:00 作者:admin

                                                關鍵字:分光光度計;分光光度法
                                                分光光度計是利用分光光度法,通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。根據分光元件的不同,分為棱鏡式和光柵式分光光度計;根據儀器結構分為單光束、準雙光束、雙光束和雙波長分光光度計;根據光源發射的光線波長不同分為可見光、紫外-可見光、紅外、熒光、原子吸收光和火焰分光光度計等。
                                                一、分光光度法的特點:
                                                有色物質對光的吸收具有選擇性。它呈現的顏色與被吸收的光線的顏色互為補色,如果要確定某種溶液選擇吸收的特定波長一般可以先用UV掃一下,確定zui大波長,也可以根據實際試樣通過查文獻來確定zui大波長。
                                                對任何一種有色溶劑,都可以測定出它的吸收光譜,UV的分光精度越高,作出的光吸收曲線的精度越高,光吸收程度zui大處的波長也就是zui大吸收波長。溶液濃度不同時,光吸收曲線的形狀相同,其zui大吸收波長不變,只是吸光度大小不同。我們在測定時一般用zui大吸收波長作為測定波長。如圖1所示:不同濃度高錳酸鉀溶液的吸光度不同,但是zui大吸收波長都是在525nm。
                                                另外,吸光度具有加合性,在某一入射波長下,溶液中含有多種對光產生吸收的物質,那么該溶液對該波長光的吸光度A總應等于溶液中每一種成分的吸光度之和。這一性質對多組分的測定極為有利。
                                                二、分光光度法應用領域:
                                                高含量組分測定-示差法當待測組分含量較高時,測得的吸光度值常常偏離朗伯-比爾定律。即使不發生偏離,也因為通常采用純溶劑作參比溶液(普通光度法),使測得的吸光度太高,超出適宜的讀數范圍而引入較大的誤差。采用示差法就能克服這一缺點。但應用示差法時,要求儀器光源有足夠的發射強度或能增大光電流放大倍數,以便能調節參比溶液透光度為100%。這就要求儀器單色器質量高,電光學系統穩定性好。
                                                多組分分析應用紫外可見分光光度法,常??赡茉谕辉嚇尤芤褐胁贿M行分離而測定一個以上組分。假定溶液中同時存在兩種組分x和y,其吸收光譜一般有重疊和不重疊兩種情況。不重疊的測定組分相互不產生干擾。若吸收光譜重疊,在波長為λ1和λ2時分別測定吸光度A1和A2,由吸光度值的加和性得到聯立方程,通過解聯立方程求得各濃度值。
                                                三、分光光度法的一般檢測項:
                                               ?。?)儀器靈敏度的檢查。配置含鉻10mg/l重鉻酸鉀溶液,在440nm下以水作為參比溶液,測其吸光度不得<0.01。
                                               ?。?)儀器重復性的檢查。在相同的工作條件下用同一溶液重復測量,其百分透光率讀數zui大誤差不得超過0.5。
                                               ?。?)波長準確度的校驗。當儀器使用一段時間后,必須對波長讀數進行校正。
                                               ?。?)更換燈泡。換燈泡時要戴手套,換后要仔細上下調正其位置,使其光斑聚焦在入射狹縫正中處。

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