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                                              分光光度法操作原理及定律

                                              日期:2020-08-12 21:57:00 作者:admin

                                                分光光度計,有很多分支,就其基本結構來說,都是由五個基本部分組成,即光源、單色器、吸收池、檢測器及信號指示系統。分光光度計主要用于反射和透射測量。分三種光源:s偏振光、p偏振光和自然光。
                                                分光光度法是利用物質對某種波長的光具有選擇性吸收的特性建立起來的鑒別物質或測定其含量的一項技術。當一束單色光通過溶液時,一部分被吸收,一部分則透過溶液。設入射光強度為io。,透射光強度為it,,則透光度t=it/io,吸光度(a)或光密度(o.d)或稱消光度(e)則可表示為a=-lgt。根據lambert-beer定律,吸光度與溶液的濃度成正比,與光束通過溶液的距離(即光程)成正比,用數學表達式表示為:
                                                a=klc
                                                式中c代表該物質的濃度,l代表光程,一般以cm表示,k為摩爾消光系數,即當溶液濃度為lmol/l,光程為1cm時所測得的一定波長下的吸光度。由于單色光透過溶液時,不僅被待測物質所吸收,而且還被比色容器與溶劑以及其它試劑吸收一部分,這部分需用空白管消除(空白液的做法即用與樣本相同的一切試劑,而不含被測定的物質)
                                                波長的選擇:
                                                波長的選擇一般是選擇待測物質zui大吸收峰的波長(λmax)。因在λmax測定吸光度,敏感度zui高。在吸收峰波長處測吸光度,波長變化影響zui小;而在其他波長處,波長變化對吸光度影響大,甚至測得濃度一吸光度曲線不呈直線。選擇測定某一溶液所需的波長,是可以用不同的波長作該溶液的吸收光譜曲線,從曲線上選擇zui適當的波長來進行這一溶液的測定工作。

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